Een goedemicroscoopmoet drie kenmerken hebben:
Goede resolutie: Resolutievermogen verwijst naar het vermogen om afzonderlijke afbeeldingen te produceren van dichtbij geplaatste objecten, zodat ze kunnen worden onderscheiden als twee afzonderlijke entiteiten. Oplossing:
Ongeveer 0,2 mm (200 μm) voor het blote oog
Optische microscoop is ongeveer 0.2μm
Elektronenmicroscopie is ongeveer 0,5 nm
. De resolutie is afhankelijk van de brekingsindex. Olie heeft een hogere brekingsindex dan lucht.
Goed contrast: kan verder worden verbeterd door het monster te kleuren.
Goede vergroting: Dit wordt bereikt door het gebruik van concave lenzen.
Brightfield- of lichtmicroscopie
Brightfield- of lichtmicroscopie produceert donkere beelden tegen een lichtere achtergrond.
donkerveldmicroscopie
Principe: Bij donkerveldmicroscopie zien objecten er helder uit tegen een donkere achtergrond. Dit kan worden bereikt door speciale donkerveldcondensors te gebruiken.
Toepassingen: Wordt gebruikt voor het identificeren van levensvatbare, ongekleurde cellen en dunne bacteriën zoals Spirochaetes die niet kunnen worden waargenomen met lichtmicroscopie.
fasecontrastmicroscoop
Het visualiseert levende cellen door contrastverschillen tussen cellen en water te creëren. Het zet subtiele verschillen in brekingsindex en celdichtheid om in gemakkelijk waarneembare veranderingen in lichtintensiteit.
Handig bij het studeren:
microbiële beweging
Bepaal de vorm van levende cellen
Detecteer bacteriële componenten zoals endosporen en inclusielichamen.
Fluorescentie microscoop
Hoe het werkt: Wanneer fluorescerende kleurstoffen worden blootgesteld aan ultraviolet (UV) licht, worden ze opgewonden en fluoresceren ze, dwz ze zetten deze onzichtbare straal met korte golflengte om in licht met een langere golflengte (zichtbaar licht).
Toepassingen: Epifluorescentiemicroscopie kent de volgende toepassingen:
Autofluoresceert bij plaatsing onder UV-licht, zoals cyclosporine
Micro-organismen bedekt met fluorescerende kleurstoffen, zoals atriol oranje voor malariaparasieten (QBC) en aurinol voor Mycobacterium tuberculosis.
Immunofluorescentie: Het maakt gebruik van antilichamen die zijn gelabeld met fluorescerende kleurstoffen om antigenen op het celoppervlak of antilichamen te detecteren die zich binden aan antigenen op het celoppervlak. Er zijn drie typen: directe IF, indirecte IF en flowcytometrie.
elektronen microscoop
Het werd uitgevonden door Ernst Ruska in 1931. Het verschilt op een andere manier van lichtmicroscopie.
Er zijn twee soorten EM:
Transmissie EM (MC-type, onderzoekt de interne structuur, resolutie 0.5 nm, geeft een tweedimensionaal beeld)
Scanning EM (onderzoekt het oppervlak met een resolutie van 7 nm, wat een 3D-weergave oplevert)
Principes van transmissie-elektronenmicroscopie
Monstervoorbereiding: Voer de volgende stappen uit op cellen om zeer dunne monsters (20 tot 100 nm dik) te bereiden
Fixatie: Fixeer cellen met behulp van glutaaraldehyde of tetroxide om ze te stabiliseren.
Dehydratatie: Het monster wordt vervolgens gedehydrateerd met behulp van een organisch oplosmiddel zoals aceton of ethanol.
Inbedden: Het monster wordt ingebed in een plastic polymeer, dat vervolgens uithardt tot een vaste massa. De meeste plastic polymeren zijn onoplosbaar in water. Daarom moeten monsters volledig worden gedehydrateerd voordat ze worden ingebed.
Snijden: Het monster wordt vervolgens met een ultramicrotoom in dunne secties gesneden en de secties worden op metalen objectglaasjes (koper) gemonteerd.
Freeze-etstechniek: Dit is een alternatieve methode voor het visualiseren van organellen in cellen voor monstervoorbereiding.
De cellen worden snel ingevroren en vervolgens verwarmd → gescheurd met een mes om de interne organellen bloot te leggen → gesublimeerd → bedekt met platina- en koolstofcoatings.
Maatregelen om het EM-contrast te verbeteren zijn onder meer:
Kleuring met oplossingen van zouten van zware metalen zoals loodcitraat en uranylacetaat
Negatieve kleuring met zware metalen zoals fosforwolfraamzuur of uranylacetaat.
Schaduw: Het monster wordt bedekt met een dunne laag platina of ander zwaar metaal in een hoek van 45 graden, zodat het metaal de micro-organismen slechts aan één kant raakt.
