Typische componenten van eenfluorescentie microscoopZijn:
Fluorescerende kleurstoffen (fluoroforen)
Een fluorofoor is een fluorescerende verbinding die weer licht uitzendt wanneer hij door licht wordt opgewonden.
Fluoroforen bevatten doorgaans verschillende gebonden aromatische groepen, of zijn vlakke of cyclische moleculen met verschillende π-bindingen.
Er zijn veel fluorescerende kleurstoffen ontworpen voor veel biomoleculen.
Sommige hiervan zijn kleine moleculen die inherent fluorescerend zijn en het biomolecuul van belang binden. Belangrijke voorbeelden hiervan zijn nucleïnezuurvlekken zoals DAPI en Hoechst, phalloidin, die worden gebruikt om actinevezels in zoogdiercellen te kleuren.
lichtbron
Er worden vier hoofdtypen lichtbronnen gebruikt, waaronder xenonbooglampen of kwiklampen met excitatiefilters, lasers en krachtige LED's.
Lasers worden voornamelijk gebruikt in geavanceerde fluorescentiemicroscopietechnieken, terwijl xenonlampen, kwiklampen en LED's met dichroïsche excitatiefilters vaak worden gebruikt in breedveldfluorescentiemicroscopie.
Excitatiefilter
De exciter is doorgaans een banddoorlaatfilter dat alleen golflengten doorlaat die door de fluorofoor worden geabsorbeerd, waardoor de excitatie van andere fluorescerende bronnen wordt geminimaliseerd en het excitatielicht in de fluorescentie-emissieband wordt geblokkeerd.
dichroïsche spiegel
Een dichroïsch filter of dunnefilmfilter is een zeer nauwkeurig kleurenfilter dat wordt gebruikt om selectief licht in een klein kleurenbereik te reflecteren, terwijl andere kleuren worden gereflecteerd.
Emissiefilter.
De emitter is meestal een banddoorlaatfilter dat alleen de golflengte doorlaat die door de fluorofoor wordt uitgezonden en al het ongewenste licht buiten deze band blokkeert, vooral het excitatielicht.
Filters zorgen voor een minimale achtergrond door ongewenste excitatie-energie (inclusief UV en IR) of autofluorescentie van monsters en systemen uit te filteren.
